隨著高效液相色譜儀（HPLC）的快速發(fā)展，越來越多的化妝品企業(yè)都配置有一定數(shù)量的HPLC。無論是原料鑒別、質(zhì)控，抑或是限、禁用物質(zhì)的定性定量檢測，都發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。

本期我們來了解HPLC重要的核心之一：色譜之眼——檢測器。

檢測器的作用

Function of detector

隨時(shí)間推移，樣品組分在經(jīng)過色譜柱有效分離后，在經(jīng)過檢測器時(shí)，會(huì)產(chǎn)生特定的信號，檢測器將之轉(zhuǎn)換、放大為可供檢測的信號，由數(shù)據(jù)記錄系統(tǒng)記錄下來，形成色譜圖，從而定性、定量分析待測組分。毫不夸張地說，沒有檢測器，HPLC就是一個(gè)“瞎子”，任何物質(zhì)從其面前經(jīng)過，也只能熟視無睹。

不同的檢測器其使用范圍有所不同，因此需要掌握不同檢測器的原理。

液相色譜常用的檢測器包括：紫外檢測器（UVD或DAD/PDA/PDAD）、熒光檢測器（FLD）、示差折光檢測器（RID）、蒸發(fā)光散射檢測器（ELSD）、質(zhì)譜檢測器（MSD）等。

紫外檢測器

UV detector

是目前液相色譜中應(yīng)用最廣泛的檢測器。自然界中大部分有機(jī)物和部分無機(jī)物都具有紫外吸收能力，紫外檢測器根據(jù)化合物對紫外光的吸收能力，從而進(jìn)行分析?，F(xiàn)在經(jīng)常能聽到的紫外檢測器（UVD）、光電二極管陣列檢測器（DAD，也稱PDA、PDAD），都是基于這個(gè)原理。

它有兩個(gè)流通池，一個(gè)參比，一個(gè)測量。光源發(fā)出的紫外光照射到流通池上，若兩個(gè)流通池都通過純的均勻溶劑，則它們在紫外波長下幾乎無吸收，光電管上接受到的輻射強(qiáng)度相等，無信號輸出；當(dāng)組分進(jìn)入測量池時(shí)，吸收一定的紫外光，使兩光電管接受到的輻射強(qiáng)度不等，這時(shí)有信號輸出，輸出信號大小與組分濃度有關(guān)。

許多紫外檢測器光源采用的是氘燈，使用范圍一般是190-800nm，開發(fā)方法時(shí)，需要考慮化合物的最大吸收波長，同時(shí)應(yīng)避開流動(dòng)相的吸收干擾來選擇合適的檢測波長。

熒光檢測器

Fluorescence detector

適用于能激發(fā)熒光的化合物。很多與生命科學(xué)有關(guān)的物質(zhì)，如氨基酸、胺類、維生素、甾族化合物及某些代謝藥物都可以用熒光法檢測。熒光檢測器在生物樣品痕量分析中具有重要作用。

但由于自然界中，能夠產(chǎn)生熒光的物質(zhì)較少，相當(dāng)一部分物質(zhì)需要進(jìn)行熒光衍生后，才可以進(jìn)行檢測（如微量的肽和氨基酸）。樣品的局限導(dǎo)致其應(yīng)用受限，但FLD靈敏度極高，讓其在檢測方面發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。

示差折光檢測器

Differential refractometer

通用型檢測器，利用物質(zhì)的折光效應(yīng)，對所有物質(zhì)均有響應(yīng)，只要被測組分與洗脫液的折光指數(shù)有差別就可使用。各類糖類化合物、脂肪烷烴等，因沒有紫外吸收，一般常用示差折光檢測器。

它的通用性比UVD廣，但靈敏度要低。與FLD相似，RID也有“短板”——對溫度變化敏感，是所有檢測器中對溫度要求最高的，同時(shí)還不能采用梯度洗脫。因?yàn)槿魏问沽鲃?dòng)相比例發(fā)生改變的因素，都會(huì)引起基線的持續(xù)變化且難以平衡，這也限制了RID的使用。

蒸發(fā)光散射檢測器

Evaporative light scattering detector

一種通用型的檢測器，原理是利用光散射效應(yīng)，可檢測揮發(fā)性低于流動(dòng)相的樣品，通過霧化器去除溶劑，讓化合物形成懸浮顆粒，從而形成散射效應(yīng)。ELSD靈敏度比RID高，對溫度變化不敏感，基線穩(wěn)定，可用于梯度洗脫，但不能使用不揮發(fā)的鹽類溶劑，而要用醋酸銨之類的揮發(fā)性緩沖鹽來代替。目前，ELSD已被廣泛應(yīng)用于碳水化合物、類脂、脂肪酸、藥物以及聚合物等的檢測。

質(zhì)譜檢測器

Mass spectrometer detector

通用型檢測器，液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（LC-MS）就是應(yīng)用了MSD，在靈敏度、選擇性、通用性及化合物的分子量和結(jié)構(gòu)信息的提供等方面都有突出的優(yōu)點(diǎn)。但它的昂貴操作費(fèi)用和復(fù)雜性在一定程度上限制了它的推廣應(yīng)用。

由此可見，作為HPLC核心之一的檢測器，充當(dāng)著“眼睛”，發(fā)揮著極其重要的作用。如果檢測器不合適，再優(yōu)秀的前處理、柱分離技術(shù)，也無法完成檢測任務(wù)。

復(fù)制